ПЦР или полимеразная цепная реакция – это единственный на сегодня метод ДНК-диагностики. Метод ПЦР разработал еще в 1983 году Кэри Мюллис, за что уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии. ПЦР позволяет быстро определять маркеры возбудителей инфекционных заболеваний (генетический материал – ДНК, РНК). По сравнению с традиционными методами диагностики, ПЦР отличается высокой чувствительностью и позволяет использовать для диагностики образцы, в которых уже нет живых возбудителей, а есть только оставшиеся фрагменты их генетического материала
ПЦР или полимеразная цепная реакция – это единственный на сегодня метод ДНК-диагностики. Иначе говоря, ПЦР - это «сыскной орган» в «криминогенной ситуации» по имени Болезнь. ПЦР путем накопления (амплификации) фактов и улик (уникальный участок ДНК) составляет косвенное доказательство предполагаемого «преступника» (возбудителя заболевания). Это обстоятельство только в совокупности с цепью умозаключений (знаний врача) и логикой клинических проявлений (симптомов и жалоб), определяет болезнь.
Метод ПЦР разработал еще в 1983 году Кэри Мюллис, за что уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии. С каждым годом на медицинский рынок поступает десятки новых разработок и тест-систем ПЦР-диагностики. Сегодня существует усовершенствованный метод ПЦР в режиме реального времени (Real-Time PCR), который лишен целого ряда недостатков своих предшественников, что значительно повышает его точность.
Назначение ПЦР - качественный и количественный анализ содержания ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) в биологических средах и субстратах. Качественная ПЦР (Polymerase chain reaction - PCR, в англоязычном варианте) применяется тогда, когда достаточно только выявить наличие фрагментов ДНК, а количественная (Real-Time PCR) - если необходимо получить информацию о вирусной нагрузке (количестве вируса), адекватности назначенного лечения или его результативности, о риске обострения заболевания.
ПЦР позволяет быстро определять маркеры возбудителей инфекционных заболеваний (генетический материал – ДНК, РНК). По сравнению с традиционными методами диагностики, ПЦР отличается высокой чувствительностью и позволяет использовать для диагностики образцы, в которых уже нет живых возбудителей, а есть только оставшиеся фрагменты их генетического материала.
При ПЦР-диагностике размножению подвергается не бактерия или вирус, а только ее ДНК (или РНК), причем не вся молекула ДНК, а только определенный фрагмент, являющийся маркером данного возбудителя. То есть, метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью, ведь для выявления конкретного микроорганизма (детекции) достаточно иметь всего лишь «осколки» его ДНК. Поэтому возможным становится обнаружение возбудителей заболеваний даже в тех случаях, когда другими способами (иммунологическим, бактериологическим, микроскопическим) их выявление невозможно.
ПЦР – высокотехнологичный метод, требующий соблюдения строжайших правил оснащения лаборатории. Достаточно сказать, что в помещении должен быть установлен фильтр биологической очистки со степенью 99,9 %, так как в воздухе постоянно присутствует невероятный коктейль из фрагментов ДНК всевозможных живых организмов, и в процессе подготовки к проведению реакции образец может быть загрязнен из окружающей среды – возможно «ложное срабатывание».
Обязательно обратитесь к доктору или, как минимум, пройдите обследование в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений (цвет, количество, консистенция), случайный половой контакт без применения презерватива. Обратите внимание на себя также при длительной невысокой температуре тела (выше 37 °С в течение 1-го и более мес.); при длительном (более 2-х мес.) кашле, общем недомогании, «беспричинной» диарее, увеличении периферических лимфоузлов, при упорной головной боли, когда везде и все болит и т.п.
Прямых противопоказаний не существует.
Наряду с тем, что ПЦР способна выявлять малейшее бактериальное загрязнение тестируемого образца, в ряде биологических жидкостей возможно присутствие ингибиторов ПЦР (например, гемоглобин). Поэтому только высокое качество всех используемых реагентов, аккуратность выполнения исследования, контроль и перепроверка позволяют получить достоверный результат.
Информативность ПЦР-анализа зависит от многих обстоятельств. К ложноотрицательному результату может привести неправильная транспортировка и хранение полученных проб, приводящие к разрушению ДНК возбудителя инфекции. Ложноположительный результат анализа может быть получен в результате попадания в материал (мазок или соскоб уретры) крови, нарушения стерильности и режимных моментов исследования (чужеродные бактерии с рук врача, одежды, со стекла или загрязненных инструментов, многоразовой посуды). В результате обнаружится «несуществующая» инфекция. Неоснащенная и несовременная лаборатория с непригодными реагентами - это еще одна из серьезных причин недостоверной диагностики.
Качественная ПЦР обычно дает положительный (возбудитель есть) или отрицательный результат (возбудителя нет). Однако оценивать результаты ПЦР должен врач, который лечит больного, так как не всегда положительный ответ ПЦР означает наличие заболевания. ПЦР выявляет не саму болезнь, а лишь генный материал возможного возбудителя этой болезни.
Положительной ПЦР может быть и у больного, и у вылеченного здорового человека. У больного человека реакция даст положительный результат за счет генного материала неповрежденного возбудителя болезни. В то время как у вылеченного человека возможен положительный результат за счет следовых концентраций неповрежденного патогена и фрагментов его распавшейся на части ДНК или РНК.
Другой вариант – это отрицательный результат ПЦР при наличии явной картины заболевания, возникает, как правило, когда материал для исследования берут неправильно или «не оттуда». Забор материала должен осуществляться в строгом соответствии с инструкциями лаборатории.
Емкости: (стеклянная или пластиковая посуда, контейнер, пробирка и др.) для забора биологического материала можно получить в лаборатории.
Срок доставки материала в лабораторию не должен превышать при комнатной температуре более 6 часов, при температуре 2 – 8 °С – более 1 суток.
ПЦР-исследование относится к разряду самых точных диагностических методов определения генетических маркеров микроорганизмов у человека. Достоверность таких исследований достигает 95 - 99 %. Однако в любой области медицины не существует абсолютных гарантий и даже самое точное и хорошее исследование может дать сбой, встретившись с индивидуальными особенностями человеческого организма. В любом случае нельзя ограничиваться только одним методом, а после определения возбудителя с помощью ПЦР, необходимо оценить и иммунный ответ в реакциях серологического тестирования. Поэтому положительный ответ лабораторного исследования – это повод не для паники, а для визита к врачу, который может при необходимости назначить вам ИФА – диагностику или некоторые из методов инструментальных исследований.